Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – наиболее информативный, точный и современный метод диагностики инфекционных заболеваний, позволяющий обнаружить возбудителя в организме пациента, даже если количество вредоносных клеток исчисляется единицами. метод применяется в медицине, биологии, ветеринарии, криминалистике, санитарной службе и других отраслях деятельности человека. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — высокоточный метод диагностики заболеваний, основанный на копировании ДНК или РНК патогена в пробе. Содержание.
Что выбрать: ПЦР-тест или тест на антитела к COVID-19?
Если отбор проводится не в лабораторном центре, необходимо учитывать время доставки проб до лаборатории. Срок выполнения исследований в референтной лаборатории — не более 48 часов с момента доставки образца. Взятие мазка методом ПЦР для обнаружения РНК SARS-CoV-2 проводится: всем лицам с признаками ОРВИ; пациентам с диагнозом «внебольничная пневмония»; лицам, контактировавшим с больным COVID-19, при появлении симптомов, не исключающих COVID-19; работникам медицинских организаций, имеющим риск инфицирования при профессиональной деятельности, до появления IgG — 1 раз в неделю; при появлении симптомов, не исключающих COVID-19, — немедленно; прибывшим на территорию Российской Федерации из-за границы; взрослым и детям из организованных коллективов - интернатов, детских домов, пансионатов для пожилых и т. Правила подготовки к процедуре забора мазка Врач должен взять мазок из ротоглотки и носоглотки. Мазки со слизистой оболочки носоглотки и ротоглотки собираются в одну пробирку для большей концентрации вируса при его наличии. Пациенту за 3-4 часа до взятия мазка нельзя есть, пить, чистить зубы, полоскать рот и горло, использовать спрей-освежитель для ротовой полости, жевать жевательную резинку, курить. Кроме того, нельзя промывать нос, использовать спреи, капли, мази для носа.
Это позволит сохранить для исследования максимально возможное число пораженных вирусом клеток эпителия наружного слоя верхних дыхательных путей. Интерпретация результатов «Обнаружено» — результат говорит о наличии РНК вируса в пробе биоматериала пациента, то есть человек инфицирован коронавирусом, заразен для окружающих. В случае получения в лаборатории положительного теста результат выдается как «первично положительный», а биоматериал передается для проведения подтверждающего теста в референсный центр Роспотребнадзора.
Врач-инфекционист Андрей Поздняков говорит, что при положительном тесте, который приходит на протяжении долгого времени, есть вероятность, что это РНК уже инактивированного вируса, но ПЦР-методика не может дифференцировать РНК «неживого» вируса от РНК жизнеспособного.
Поэтому определить, заразен ли человек при получении положительного результата ПЦР, не представляется возможным. Поэтому единственной гарантией от дальнейшего распространения вируса в данном случае может служить продолжение изоляции. Это могут быть остатки разрушенного вируса. Именно они могут давать такой результат, но пока нужно всё равно сдавать тесты.
Владимир Болибок полагает, что само ощущение выздоровления у человека может быть ложным — пациент может чувствовать себя хорошо относительно того состояния, которое было при госпитализации или начале болезни. После затяжного течения вирусной инфекции было бы целесообразно обратиться за консультацией к иммунологу.
В таком случае ПЦР-тест всегда даст положительный результат. Ранее Дмитрий Медведев заявил, что в плане регламентирования коронавирусных ограничений и ответственности за их нарушение российское законодательство остается очень либеральным. Он отметил, что в РФ вакцинация обязательна только для определенной категории граждан, за отказ от прививки не предусмотрены административная или уголовная ответственность.
Отрицательный и ложноотрицательный результат Однако, отрицательный результат ПЦР-анализа, к сожалению, не говорит об обратном, не исключает наличие вируса в организме. Мы можем только говорить, что вирус не обнаружен. Не обнаружен в исследуемом биоматериале, которым чаще всего является мазок из рото- или носоглотки. Почему так происходит? Потому что вирус совсем недолго находится на слизистой верхних дыхательных путей, спускаясь в бронхи и лёгкие — мишень поражения. Поэтому лучше искать его ниже — в мокроте, выделяемой при кашле, и смывах из нижних дыхательных путей бронхоальвеолярный лаваж. Участки генома вируса способны связываться с гемом, нарушая функцию гемоглобина в эритроцитах. Это мешает транспортировке кислорода клетками крови и именно гипоксия недостаток кислорода негативно влияет на лёгкие. Влияние вируса на кровь подталкивает к мысли, что именно в ней мы можем найти SARS-Cov-2 в тяжёлых клинических случаях, хотя не обнаруживаем его на слизистых верхних дыхательных путей. Мы должны научиться выделять вирус из крови. Описана даже кишечная форма короноавируса, проявившаяся тошнотой, рвотой, диареей. И искать его тогда следует в кишечнике, диарейных массах и анальных мазках. Это, кстати, дополнительный фактор, свидетельствующий о том, что вирус передаётся не только воздушно-капельным путём, но и фекально-оральным.
Что выбрать: ПЦР-тест или тест на антитела к COVID-19?
Если у человека положительный ПЦР-тест, первое, что он должен сделать — это позвонить в свое лечебное учреждение. Положительный анализ ПЦР – что это значит? ПЦР или, иначе, полимеразная цепная реакция – это современный высокоинформативный метод молекулярно-генетической диагностики, активно применяемый для выявления у человека различных инфекционных и наследственных заболеваний.
Какой метод диагностики лучше?
- Сколько можно болеть: почему даже спустя месяц ПЦР-тест на ковид остается положительным
- ПЦР на гепатит C: расшифровка количественного и качественного анализа, норма
- ПОДПИСАТЬСЯ НА РАССЫЛКУ
- Сколько можно! Почему долгое время держится положительный ПЦР-тест на коронавирус
- Может ли ПЦР-тест на COVID-19 показать положительный результат при простуде
ПЦР диагностика: что это такое
Все исследование занимает около трех часов, рассказывает технолог подразделения молекулярно-генетических исследований лаборатории Маргарита Абрамова. Если результат положительный — его повторяют, и только в случае двойного положительного результата пациенту сообщают о болезни. Анна Солдатова.
Необходимо строго соблюдать правила сбора биоматериала и его хранения. Важно выбрать правильное время взятия биоматериала и выполнить правила подготовки к тесту. В частности, это касается и нового коронавируса, который присутствует в выделениях носоглотки и ротоглотки только в течение определенного времени, по истечении которого анализ окажется отрицательным. Кроме того, высокая чувствительность ПЦР может иногда превращаться из преимущества в недостаток. Показания к проведению ПЦР-анализа ПЦР-тесты используются для: диагностики инфекционных заболеваний, вызванных вирусами, бактериями и грибами, в том числе для определения возбудителей ряда урогенитальных инфекций; определения патологических генетических нарушений; определения роста и развития раковых клеток. ПЦР тест также можно использовать для прямой диагностики наличия заболевания и мутаций в развивающемся эмбрионе.
Например, впервые ПЦР была использована таким образом для диагностики серповидно-клеточной анемии путем обнаружения мутации одного гена. Как проводится ПЦР-анализ Метод полимеразно-цепной реакции постоянно развивается. Самым распространенным на сегодня является тест в реальном времени, с помощью которого можно определить исходное количество копий ДНК РНК. ПЦР с вложенной парой праймеров гнездовая проводится в две стадии для снижения вероятности амплификации неспецифичных участков ДНК. Инвертированная ПЦР используется в случае, когда нужно выяснить природу неизвестных участков ДНК, окружающих известный. Это только часть методов ПЦР, количество которых постоянно пополняется новыми технологичными вариантами.
Это приводит к тому, что тест становится неинформативным. А вот есть он или нет у человека - зависит от того, насколько технически правильно был взят мазок. Иными словами, если есть клиника вирусной пневмонии, но тест отрицательный, то всё равно лечим как COVID. Или повторяем тест после забора материала во время бронхоскопии. Тест требует специальной довольно сложной аппаратуры. Его сверхчувствительность приводит и к нежелательным последствиям. Тест может определять "обрывки", фрагменты вируса и приводить к ложноположительным результатам. При большой нагрузке на лабораторию она становится контаминированной, "загрязненной" с вирусологической точки зрения и выдавать ошибки", - отмечает доктор. Он поясняет, что вирус в носоглотке зараженного появляется примерно за неделю до появления симптомов и продолжает выделяться в среднем еще две недели после их начала.
В этом методе используют флуоресцентно меченые ДНК-зонды для анализа накопления продукта реакции или интеркалирующий краситель SYBR Green или его аналоги. Sybr Green I [en] обеспечивает простой и экономичный вариант для детекции и количественного определения ПЦР-продуктов в ходе ПЦР в режиме реального времени без необходимости использования специфичных флуоресцентных зондов или праймеров. Кроме главного, в спектре красителя имеются два небольших дополнительных максимума поглощения — при 290 нм и 380 нм. Первые циклы проводят при температуре выше оптимальной температуры отжига, затем каждые несколько циклов температуру отжига постепенно снижают до оптимальной. Это делается для того, чтобы праймер гибридизовался с комплементарной цепью всей своей длиной; тогда как при оптимальной температуре отжига, праймер частично гибридизуется с комплементарной цепью. Частичная гибридизация праймера на геномной ДНК приводит к неспецифической амплификации, если участков связывания для праймера достаточно много. В точках, содержащих анализируемую ДНК, происходит амплификация с образованием молекулярных колоний. Вторая полимераза необходима для коррекции ошибок, внесённых первой, так как Taq-полимераза останавливает синтез ДНК, если был добавлен некомплементарный нуклеотид. Этот некомплементарный нуклеотид удаляет Pfu-полимераза. Смесь полимераз берётся в отношении 50:1 или даже меньше 100:1, где Taq-полимеразы берётся в 25—100 раз больше, чем Pfu-полимеразы. RAPD Random Amplification of Polymorphic DNA [en] , ПЦР со случайной амплификацией полиморфной ДНК — используется тогда, когда нужно различить близкие по генетической последовательности организмы, например, разные сорта культурных растений, породы собак или близкородственные микроорганизмы. В этом методе обычно используют один праймер небольшого размера около 10 п. Этот праймер будет частично комплементарен случайным участкам ДНК исследуемых организмов.
Сколько стоит сдать ПЦР-анализ
Благодаря этому лечение начинается на первичной стадии, задолго до того как появляются разного рода осложнения. ПЦР более объективен, чем многие другие иммунологические способы диагностики, поскольку практически не даёт ложно-положительных ложно-отрицательные значительно более редки ввиду высокой чувствительности метода. Следует учитывать, что точность и достоверность диагностики методом ПЦР зависит от возможностей лаборатории, квалификации врачей, качества забора материала и от соблюдения правил подготовки к сдаче анализа. Эти инструкции не сложны, но их точное выполнение гарантирует, что в исследуемый образец не попадут посторонние вещества или жидкости другого человека.
Все исследование занимает около трех часов, рассказывает технолог подразделения молекулярно-генетических исследований лаборатории Маргарита Абрамова. Если результат положительный — его повторяют, и только в случае двойного положительного результата пациенту сообщают о болезни. Анна Солдатова.
Преимущества метода ПЦР Высокая специфичность. Метод ПЦР определяет заданную последовательность нуклеотидов, присущую конкретному патогену.
Исключен риск ложноположительных результатов. Для ПЦР достаточно всего несколько молекул ДНК патогена или даже уже неактивных — разрушенных вирусных частиц, сохранивших специфические участки ДНК в достаточном количестве , чтобы он был обнаружен в ходе исследования. Скорость проведения. Лаборатория получает результат ПЦР-теста через несколько часов, клиент — уже на следующий день. Скорость диагностики имеет принципиально важное значение для своевременного лечения. Например, при диагностике бактериальных инфекций классический посев занимает от нескольких дней, а с ПЦР-анализом пациент сможет принять меры и начать лечение уже через сутки. Для исследования подходит любой биоматериал: кровь, моча, сперма, мокрота, гной, жидкости из абсцессов и пр. Кроме этого, ПЦР применяется в самых разных областях науки и медицины, работая даже там, где другие методы бессильны.
Диагностика латентных инфекций. ПЦР-диагностика определяет возбудителя инфекции даже в инкубационном периоде и при скрытом течении заболевания. Какие есть недостатки Единственный серьезный недостаток, связанный с методом полимеразной цепной реакции, - его высокая технологичность. Исследования ПЦР требуют строжайших соблюдений правил и серьезной оснащенности лабораторного комплекса. Не каждая лаборатория может позволить себе все необходимое оборудование. Урогинекология диагностика инфекций, передающихся половым путем: хламидиоз, уреаплазма, микоплазма, кандиды, гарднерелла, герпесвирусы. Важное значение для женского и мужского здоровья играет ВПЧ — вирус папилломы человека.
Чувствительность диагностических инструментов для выявления мутаций онкогенов и генов подавления опухоли была улучшена по крайней мере в десять тысяч раз благодаря ПЦР, что позволяет раньше диагностировать, например, такие виды рака, как лейкемия. Метод ПЦР также позволил разработать индивидуальную терапию для больных раком. Кроме того, ПЦР может использоваться для типирования тканей, которое имеет жизненно важное значение для имплантации органов. Образцы берут либо с помощью амниоцентеза либо с помощью биопсии ворсин хориона. В отличие от многих других тестов, ПЦР тест способен обнаружить признаки заболевания на самых ранних стадиях инфицирования, так как для выделения искомого ДНК или РНК достаточно минимального количества генетического материала патогена в образце биоматериала. Другие виды исследования могут оказаться ложноотрицательными из-за того, что в образце недостаточно много вирусов или бактерий или организм не успел выработать достаточное количество антител. ПЦР-анализ проводится на образце одного из следующих видов биоматериала: кровь, слюна, слизь, ткань, гной, мокрота, моча. Этот процесс называется ПЦР с обратной транскрипцией. Обнаружение вирусной РНК с помощью ПЦР позволяет обеспечить диагностику COVID-19 на ранней стадии - до того, как организм выработает ответ в виде антител или даже до того, как у человека появятся симптомы заболевания. Тесты ПЦР играют решающую роль в предотвращении распространения заболеваний, так как часто позволяют выявить инфекции на ранней стадии, еще до появления симптомов. Количественный ПЦР-анализ позволяет оценить инфекционную нагрузку на организм, а также используется для анализа изменений экспрессии генов в опухолях. Важна также и высокая скорость проведения исследования.
ПЦР-тест и тест на антитела к коронавирусу: как разобраться в результатах?
метод применяется в медицине, биологии, ветеринарии, криминалистике, санитарной службе и других отраслях деятельности человека. medium ПЦР (Полимеразная цепная реакция) Если попытаться описать ПЦР-диагностику в трёх словах, то это, совершенно определённо, будут слова ТОЧНО, НАДЁЖНО, БЫСТРО. Результат ПЦР-анализа либо положительный, либо отрицательный. Положительный указывает на то, что у человека присутствуют фрагменты ДНК возбудителя заболевания, то есть, что человек заражен и ему необходимо лечение. Полимеразная цепная реакция (ПЦР, PCR) — это точный метод лабораторной диагностики, который используют для выявления возбудителей инфекционных заболеваний. Полимеразная цепная реакция почти для каждого из нас стала обыденностью, даже если этот каждый никогда и слов таких не слышал.
Другие методы диагностики половых инфекций
- ПЦР-тест: что это, расшифровка анализа, как его делают
- Всегда ли положительный тест на COVID-19 означает, что пациент заразен?
- О методе ПЦР
- Что такое анализ крови на ПЦР, и зачем он нужен
- ПЦР тест на коронавирус: что это и как проводится диагностика
ПЦР ДИАГНОСТИКА. Что это такое?
Если у человека положительный ПЦР-тест, первое, что он должен сделать — это позвонить в свое лечебное учреждение. Чаще всего ПЦР-тест показывает ложноположительный результат из-за наличия в носу или ротоглотке фрагментов уже погибшего вируса, рассказал в интервью Лайфу доктор медицинских наук, практикующий врач, профессор Антон Ершов. ПЦР – это тест, позволяющий определить или исключить наличие конкретной инфекции у пациента, то есть исследование представляет собой этиологическую диагностику патогенного возбудителя. Положительный анализ ПЦР – что это значит?
Ученый раскрыл правду о тестах на коронавирус: почему бывают ошибки
Различие тестов на коронавирус По материалам интервью с зав. Станкевич Л. Лабораторией госпиталя Hadassah Medical руководит Любовь Ивановна Станкевич, кандидат медицинских наук, специалист в лабораторной диагностике с более, чем 25-летним опытом работы в России и за рубежом, из них почти 20 лет на руководящих должностях. В условиях пандемии COVID-19 она занимается созданием системы тестирования на коронавирус SARS-Cov-2 — диагностики заболевания, с применением не просто разных, а наилучших, наиболее информативных лабораторных диагностических методов, отвечающих цели исследования. Обнаружение вируса Первый и наиболее проверенный и широко используемый метод — ПЦР-диагностика. Используя молекулы мишеней, мы ищем в исследуемом образце специфические участки вирусного генома — последовательности нуклеотидов, характерные только для вируса SARS-Cov-2. И если такие находятся, запускаем цепную реакцию, многократно воссоздавая этот фрагмент. В итоге из единичного найденного участка генома вируса создаётся в тысячи раз усиленная его концентрация. Со специфическим фрагментом генома вируса с продуктами реакции , связывается флюоресцентная метка — своеобразный маркер, который мы можем определить и измерить, поймав оптико-флюоресцентный сигнал.
Существуют различные модификации этого метода, но цель их одна — поиск специфических участков генома вируса, присутствие которых позволяет сделать вывод, что в данном биоматериале вирус есть. Все — и азиатские врачи, и европейцы, и американцы, и мы в России и в Израиле — все работают этим методом. Отрицательный и ложноотрицательный результат Однако, отрицательный результат ПЦР-анализа, к сожалению, не говорит об обратном, не исключает наличие вируса в организме. Мы можем только говорить, что вирус не обнаружен.
При этом только у одного из пациентов имелась и репликативная субгеномная РНК. Она присутствует внутри клетки, но не упаковывается в вирионы, следовательно, ее наличие говорит о том, что вирус поражает клетки больного, то есть о рецидиве или повторном заражении.
Авторы отмечают, что этот пациент был пожилым, имел хронические заболевания и симптомы инфекции на момент тестирования на 16-й день после выздоровления. Также на репликативную РНК были проверены и предыдущие образцы от 32 пациентов с обнаруженной общей РНК , полученные на момент постановки диагноза и хранившиеся в замороженном виде. Выяснилось, что во время первого тестирования все испытуемые имели репликативную РНК коронавируса.
Нижегородская, д. Лекарственные препараты, информация о которых содержится на настоящем сайте, имеют противопоказания, перед их применением необходимо ознакомиться с инструкцией и проконсультироваться со специалистом. Мнение Администрации может не совпадать с мнением авторов и лекторов. Сайт не несет никакой ответственности за любые рекомендации или мнения, которые могут содержаться, ни за применимость материалов сайта к конкретным клиническим ситуациям.
Вся научная информация предоставляется в исходном виде, без гарантий полноты или своевременности. Администрация прикладывает все усилия, чтобы обеспечить пользователей точной и достоверной информацией, но в то же время не исключает возможности возникновения ошибок.
По согласованию с врачом лучше отказаться от приёма мочегонных препаратов. Перед взятием биоматериала необходимо тщательно вымыть наружные половые органы. Женщинам рекомендуется обработать половые губы ватными тампонами: сначала — смоченными в тёплой воде с мылом, затем — смоченными в чистой воде.
Движения тампона должны быть направлены от лобка к заднему проходу. Лишнюю влагу удалить чистой салфеткой. Мужчинам следует тщательно вымыть отверстие мочеиспускательного канала тёплой водой с мылом, оттянув кожную складку, промыть водой и промокнуть чистой салфеткой. Биоматериал следует собрать в одноразовый стерильный контейнер. Его можно бесплатно получить в любом лабораторном отделении Гемотест.
Инструкция по использованию контейнера Открутите крышку контейнера и положите её, не касаясь внутренней части крышки. Соберите первую порцию мочи в контейнер. Если мочу на анализ берут у ребёнка, можно использовать мочеприёмник. Закройте контейнер крышкой и плотно закрутите её. Доставьте контейнер в лабораторное отделение в течение 2 часов после взятия биоматериала.
Как определить коронавирус или что такое анализ ПЦР?
Таким образом, при простуде ПЦР-тест не может дать положительный результат на коронавирус. ПЦР-тестирование рекомендовано для диагностирования COVID-19 ВОЗ и Центром по контролю и профилактике заболеваний США. Сделав антигенный экспресс-тест, а иногда не один, и получив положительный результат, многие пытаются подтвердить диагноз в лаборатории с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Положительный ПЦР означает только то, что Вы заразны для окружающих и выделяете вирус. метод применяется в медицине, биологии, ветеринарии, криминалистике, санитарной службе и других отраслях деятельности человека. Подробное описание: что такое ПЦР-тест на ковид, что показывает и как узнать результат. Как проводится забор биоматериала, как подготовиться.
Почему полимеразная реакция — цепная?
- Достоинства и недостатки
- Диагностика COVID-19: обзор основных методов
- Что такое положительный анализ ПЦР? Что означает, если анализ ПЦР положительный?
- ПЦР-тест и тест на антитела к коронавирусу: как разобраться в результатах?
- Какую информацию дает тест на антитела
- Как определить коронавирус или что такое метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)?