это методика, позволяющая выявить даже небольшие концентрации возбудителя инфекции.
ПЦР-диагностика на гепатит С: когда нужны анализы и что они показывают?
Только что рассмотренный комплекс ПЦР 12 относится как раз к этой категории. Но существует ещё количественный анализ, или ПЦР в режиме реального времени. Метод основывается на том, что число новых ампликонов копий заданного участка ДНК возбудителя болезни прямо пропорционально их исходному количеству. То есть если в пробе с самого начала было много вредоносных молекул ДНК, то с каждым циклом полимеразной цепной реакции их будет становиться вдвое больше, а к концу процесса накопятся миллионы. Современные приборы амплификаторы следят за тем, как меняется количество копий, и по итогам исследования вычисляют примерную концентрацию возбудителя в организме пациента. Для чего это нужно? В случае с бактериями, простейшими или грибками подобные сведения имеют спорную диагностическую ценность, поскольку численность колоний постоянно меняется под воздействием самых разных факторов, да и уничтожить такие микроорганизмы сравнительно просто.
Другое дело — вирус. Это неклеточная форма жизни, которую невозможно истребить подобно тому, как антибиотики справляются с бактериями. В борьбе с вирусами человек может твёрдо рассчитывать только на свой иммунитет, а возможности противовирусных средств сильно ограничены. Именно когда дело касается вирусов, становится особенно актуальной методика ПЦР в режиме реального времени. Вирусная нагрузка или виремия — это степень тяжести поражения организма вирусом. Показатель рассчитывается путём определения числа вирионов в биологическом материале, измеряется в МЕ или в количестве копий на 1 мл крови и служит для контроля над ходом терапии и предупреждения распространения вируса.
Но и в случае с другими вирусами определение нагрузки может оказаться полезным — например, когда речь идёт о цитомегаловирусе, герпесе или папилломовирусе. Анализ поможет понять, грозит ли человеку очередное обострение болезни, и насколько высока вероятность передачи инфекции. ВИЧ-инфицированным людям назначается антиретровирусная терапия. Её цель — максимально снизить вирусную нагрузку, а в идеале — сделать её неопределяемой.
В итоге люди с ложноотрицательными результатами не соблюдают режим самоизоляции и заражают других. Исследователи проанализировали семь статей с четкими данными по промежуткам времени между заражением, появлением симптомов и тестированием.
После исключения недостоверных данных в исследование вошло 1,3 тыс. На четвертый день уже треть зараженных получили положительный результат анализа. На пятый день обычно появляются первые симптомы COVID-19 — и тут уже почти две трети тестов показали правду.
Чтобы определить одну инфекцию, придется отдать в пределах 200-800 рублей. Также добавляется плата за взятие биоматериала — примерно 400 рублей.
Результаты ПЦР диагностики Методика обладает сто процентной специфичностью, то есть в ходе анализа определяется именно запланированный возбудитель. В отличие от микроскопии мазков при данном исследовании нельзя принять один вид возбудителя за другой. Или спутать его с внешне похожими клетками, например, измененным эндотелием. Даже обломки нуклеиновых кислот, остающиеся после инфекционного агента по окончании терапии специфическими антибактериальными препаратами, будут давать положительные результаты анализов ПЦР. Для получения максимально достоверных результатов важен правильный забор биологического материала.
Он должен исключать загрязнение инородными инфекционными агентами. ПЦР положительный чаще всего фиксируется в период клинических симптомов разгара болезни. В случае носительства возбудителя, а также до трех-шести месяцев после проведения лечения и эрадикации возбудителя. Нередко встречается и ложноположительные результаты ПЦР сразу после лечения. Когда разрушенные участки генетического материала уже погибшего возбудителя еще сохраняются в крови или биологических средах.
Результат становится отрицательным по истечении шести-девяти месяцев после терапии. Какой врач проводит расшифровку ПЦР-исследований Первично назначается анализ либо венерологом, либо урологом, либо гинекологом для женщин. Оценка анализа и выставление результатов в бланке ответа — это функция врача-лаборанта, проводившего исследование. Дальнейшая интерпретация полученных данных — это функционал узкого специалиста, к которому обращается пациент. Врач назначает такие исследования обычно при: признаках острого воспаления урогенитального тракта, для уточнения причины воспаления, перед планируемой беременностью или эко, у беременных с отягощенной акушерской историей, для контроля эффекта от проводимого лечения по поводу вензаболевания не раньше, чем спустя месяц после окончания терапии , в качестве скрининга для исключения бессимптомного течения инфекции при наличии более одного партнера за год.
Методы молекулярной биологии имеют важное от культуральных или серологических методик отличие. Они не требуют определенного накопления возбудителя или антител к нему и чувствительны практически сразу от момента заражения. Нет смысла выдерживать паузу в течение предполагаемого инкубационного периода венерической инфекции. Анализ можно сдавать сразу после того, как возникли подозрения о возможном заражении или развитии инфекционного агента. ПЦР: результат отрицательный Отсутствие возможности даже ускоренного ферментами удвоения фрагментов генетического материала говорит об отрицательном результате исследования.
Чаще всего при отрицательном результате речь идет о том, что специфические для искомого возбудителя ДНК или РНК не обнаружены. Или концентрация генетического материала ниже пороговой чувствительности теста. Как выглядит бланк результатов ПЦР анализов? Первый вариант говорит о наличии инфекционного процесса, вызванного искомым возбудителем. Второй — об отсутствии генетического материала инфекционного агента или его количестве ниже порога чувствительности.
Расшифровка результатов ПЦР исследований проводится в тот же день, когда получены результаты или в момент обращения к врачу. Время получения данных анализа составляет от нескольких часов до трех суток в зависимости от лаборатории. Идеальным можно считать вариант, когда от момента первичного обращения к врачу до интерпретации проб проходит не более суток в клиниках, оснащенных современными лабораториями. Однако и она не исключает ложноположительных или ложно отрицательных ответов.
ПЦР-диагностика позволяет правильно определить тактику ведения и риски внутриутробной инфекции. Респираторные заболевания. Диагностика методом ПЦР стала в 2020 году актуальной как никогда и продемонстрировала свою незаменимость и эффективность. ПЦР-анализ — главный тест и «золотой стандарт» диагностики коронавирусной инфекции Sars-Cov-2 COVID-19 , ставшей причиной самой масштабной пандемии последних десятилетий. Наследственные заболевания и отцовство также диагностируются при помощи метода ПЦР. ПЦР-тесты применяются везде, где нужен быстрый, точный и надежный результат.
Подготовка к проведению ПЦР-теста Еще одно немаловажное преимущество ПЦР-анализов — это отсутствие специфической подготовки к проведению тестов. Достаточно следовать стандартным рекомендациям специалиста: Анализ сдается утром натощак. При этом ряд генетических исследований проводится в произвольное время, удобное пациенту. При сдаче анализа по мазку из ротоглотки необходимо выдержать интервал с приемом пищи и воды в 3-4 часа перед тестом. Перед анализом на венерические инфекции необходимо воздержаться от половой активности в течение суток. Перед анализом нельзя использовать никакие противовирусные препараты. Подробную инструкцию по правилам подготовки к каждому анализу вы всегда можете получить у лечащего врача или у консультантов на нашей горячей линии. Как проводится ПЦР-анализ С 1983 года, когда был изобретен данный метод, прошло много времени, и технологии не стоят на месте. Сегодня существует несколько различных методик для проведения ПЦР-теста: С обратной транскрипцией. Самый распространенный способ идентификации известной последовательности РНК, включающий амплификацию, определение патогена и его идентификации среди образцов, хранящихся в научной картотеке.
Вложенная ПЦР или «гнездовая» — используется для снижения количества неспецифичных продуктов реакции и имеет две стадии с использованием двух видов праймеров.
Контроль взятия материала (КВМ) - что это такое?
Расшифровка результатов количественного анализа ПЦР играет важную роль в обнаружении и проверке эффективности лечения большого числа хронических заболеваний, скажем гепатита C. Что такое ПЦР, как работает метод ПЦР в диагностике, преимущества методики, показания, подготовка к проведению ПЦР-анализа, как проводится ПЦР-анализ, что показывают результата теста. Если результат ПЦР отрицательный или нет признаков болезни, повторить тест на антитела через 2-3 недели. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является мощнейшим инстументом современной молекулярной биологии. Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный).
Азбука жизни. Зачем в онкологии нужны ПЦР-тесты и какую информацию о болезни хранит в себе ДНК
Полимеразная цепная реакция (ПЦР, PCR) — это точный метод лабораторной диагностики, который используют для выявления возбудителей инфекционных заболеваний. Однако в случае с полимеразной цепной реакцией расшифровка результатов ПЦР исследований мало зависит от биологического материала, который брался у пациента. Чтобы это сделать, мы разрабатываем ПЦР-тест, который будет «смотреть» конкретно этот вариант из всего генома, есть он у человека или нет.
Результаты ПЦР диагностики
Что показывает анализ Результаты готовы в течение двух дней. По заключению лаборатории можно узнать: Есть ли в исследуемом материале ВПЧ. Правильность взятия соскоба. Генотип присутствующего вируса или вирусов. Исследование проводится качественно и количественно. Качественное определение — это когда в заключении только отметка о наличии или отсутствии данного генотипа возбудителя. Количественное определение — это информация не только о присутствии вируса, но и о его концентрации. Отрицательный ответ совсем не означает, что ВПЧ вообще нет. Просто количество его настолько минимально, что не опасно по возможности развития патологии, особенно рака шейки матки.
Чем больше вирусов, тем вероятность развития онкологического процесса выше. По генотипу можно спрогнозировать возможную форму вирусной инфекции. Показания к исследованию Определение ВПЧ в гинекологических мазках проводится: Если имеются опухолевидные разрастания в области половых органов и необходимо уточнение причины их появления. Для выявления скрыто протекающей инфекции. С целью контроля за эффективностью лечения. В случае выявления отклонений при исследовании цитологии мазков из цервикального канала и влагалища.
Реакция проводится в несколько этапов: Денатурация прогревание Сначала раствор нагревают, в результате чего цепочки ДНК расходятся. Стадия отжига Раствор остужают, праймеры связываются с одноцепочечной матрицей. Этап элонгации Полимераза создает дочернюю цепь ДНК, достраиваются все фрагменты цепочки. Цепочка может расти до пределов, которые задаются количеством реагентов, затем достигает состояния плато.
Для обнаружения гепатита в применяют два типа реакции: количественную и качественную. Измерение проводится после каждого этапа, то есть в режиме реального времени. Это достигается при помощи флюоресцентных зондов, которые включаются в цепочку молекул и светятся в определенный период исследования. Данный способ применяют для обнаружения фрагментов ДНК, которые являются маркерами вируса гепатита. С помощью количественного метода удается точно выделить генотип вируса. Другими словами, подсчитывают количество копий генома ВГВ на количество клеток больного. Количественный анализ дает ответы на следующие вопросы: С какой интенсивностью прогрессирует болезнь. Насколько эффективно проводимое лечение. Развилась ли резистентность к назначенным препаратам. Также количественное измерение необходимо для диагностики хронической стадии инфекции.
При острой фазе количество антител значительно выше. При антивирусной терапии повышение количества антител свидетельствует о развившейся устойчивости к лекарствам, это является сигналом для корректировки лечения. Если они отсутствуют, то пациент не заражен, при попадании возбудителя в кровь результат будет положительным. Однако, с помощью качественной реакции невозможно уточнить геном вируса, этап заболевания. Поэтому для диагностики ВГВ проводят как количественное, так и качественное измерение. Подготовка к обследованию Для проведения анализа методом полимеразной реакции необходима венозная кровь.
В бланке указывается, какие штаммы исследуются. Например, популярен анализ на выявление 14 штаммов ВПЧ с номерами 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68, а также скрининг только на два самых опасных — 16 и 18. Результат «обнаружено» в этом анализе расшифровывается как инфицирование одним из вирусов данной группы или несколькими из них, но какими именно, исследование не покажет.
Таким образом, скрининг только фиксирует заражение или его отсутствие на данный момент. Он не может показать количество вируса в организме и не может быть основанием для назначения лечения. Присутствие ДНК ВПЧ не означает, что человек болен — это лишь повод для более тщательного наблюдения в дальнейшем и повторной сдачи анализов через год — два. Возможно, через этот срок вирус покинет организм. Кроме единой строчки с перечислением номеров ВПЧ, в таблице на бланке такого анализа будет лишь еще одна строка — КВМ. Эта аббревиатура расшифровывается как «контроль взятия материала». Данный показатель нужен для того, чтобы видеть, правильно ли проведена процедура забора биоматериала, достаточно ли в нем клеток эпителия, чтобы выполнить корректную амплификацию. Если этот показатель меньше, значит, материал был взят неправильно. В полученном образце слишком мало клеток, и среди них может не оказаться пораженных вирусом.
Тогда будет получен ложноотрицательный результат. Дифференцированный анализ ПЦР В данном анализе используется генотипирование — определение специфической последовательности ДНК каждого из исследуемых штаммов в отдельности. Так можно определить, какой конкретно штамм присутствует в организме. Также выполняется оценка КВМ. Читайте также: Это тоже скрининговый метод, только расширенный, более подробный. Он фиксирует лишь факт заражения, но не определяет, стал ли конкретный вид ВПЧ провокатором заболевания. Однако вместе с цитологическим мазком, такой ПЦР-анализ повышает эффективность выявления ассоциированных с ВПЧ заболеваний половых органов. Количественный анализ ПЦР Количественный анализ диагностически более значим, чем качественный, ведь он определяет вирусную нагрузку на организм. Обычно назначается при положительных результатах качественного теста.
Концентрация вируса в тканях отражает тяжесть течения инфекции, позволяет врачу составить прогноз ее течения с учетом клинических симптомов или отследить результативность проведенного лечения. В количественном анализе подсчитывается число копий вируса, приходящихся на число клеток эпителия. Это значит, что вирус для организма неопасен и, скорее всего, иммунная система успешно подавит его. Такой результат у женщины дает основания для беспокойства. Скорее всего, врач назначит кольпоскопию с биопсией, чтобы выяснить, в каком состоянии находится эпителий шейки матки. При лечении заболеваний, ассоциированных с ВПЧ, имеет значение отслеживание вирусной нагрузки в динамике. Если же вирусная нагрузка в контрольных анализах через 3, 6 9, 12 месяцев после лечения на порядок увеличилась — это признак рецидива инфекции. Крем и таблетки: цена, отзывы, аналоги Результаты количественного или качественного анализа обычно готовы уже на следующий день после сдачи. Он позволяет выявить конкретные штаммы, присутствующие в клинически значимой концентрации.
Этот анализ и самый дорогой. Его цена примерно в два раза выше, чем у качественного анализа на такое же количество штаммов в среднем 2200 против 1200 не считая стоимости забора материала. Дайджин-тест более простой в выполнении, чем ПЦР-анализ, и вместе с этим отличается высочайшей надежностью. Поэтому многие развитые страны включают в скрининговое исследование именно его. Тест может быть комплексным — для группы низкого и повышенного риска, или проводиться отдельно для каждой группы.
В первом случае человеку предлагается сдать кровь в медицинском учреждении. У анализа есть преимущества: низкая цена по сравнению с ПЦР; высокая скорость до получаса ; простота реализации. Однако точность его вызывает сомнения. Экспресс-анализ показывает только присутствие компонентов вируса, а не его самого.
Поэтому все положительные пробы важно перепроверять методом ПЦР. С экспресс-наборами например, Standard Q Covid-19 человек работает сам. Это не аналог иммунохроматографии: кровь здесь не понадобится, достаточно мазка из носоглотки. Что именно нужно делать — написано в инструкции. При контакте биоматериала с реагентом происходит реакция с окрашиванием как с тестом на беременность. Такое исследование на коронавирус достаточно быстрое до 20 минут , однако не слишком точно. Тест на антитела Антитела к коронавирусу, выявленные в организме, показывают его реакцию на возбудитель. Если он вырабатывает специфические иммуноглобулины, это может означать, что: человек переболел COVID-19 в том числе бессимптомно ; антитела способны бороться с вирусом в случае его повторного проникновения в кровь; человек может быть донором и спасать других зараженных, кто переносит заболевание тяжелее. Если тестирование показало, что антитела к коронавирусу присутствуют, это еще не значит, что их носитель больше никогда не заболеет.
Хотя статистика имеется небольшая, вирусологи пришли к выводу, что положительный тест на антитела может ненадолго приравниваться к вакцинации. Однако это справедливо в течение полугода после выявления инфекции. По истечении этого срока вновь появляются риски, и пациенту рекомендована прививка. Как расшифровать анализ на антитела? Обследуемый на антитела может иметь в организме несколько видов белков, вырабатываемых иммунной системой: IgM — реакция на любую острую инфекцию. Обычно присутствуют в организме в течение месяца после заражения, однако при COVID-19 этот срок увеличивается до 3 месяцев. Могут сохраняться даже в отсутствие вируса. Их количество должно снижаться по мере выздоровления. IgG — запоминающая реакция организма на перенесенную инфекцию.
Синтезируются через 6 недель после заражения и формируют иммунитет. Если в анализе на антитела есть IgA, значит, человек столкнулся с коронавирусом.
Содержание:
- Диагностика методом ПЦР: современный подход выявления инфекционных и генетических заболеваний
- Количественный анализ: когда он нужен?
- Преимущества ПЦР-диагностики
- Что такое ПЦР?
- Почему "ошибаются" ПЦР-тесты - эксперт
- HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]
В Минздраве объяснили, от чего зависит результат ПЦР-теста
ПЦР-тест или полимеразная цепная реакция – метод молекулярно-генетического исследования, указывающий на наличие или отсутствие инфекции в организме больного. Расшифровка результатов ПЦР требует учета данных прочих исследований, хотя формально находки, полученные в процессе полимеразной цепной реакции исчерпывающе и однозначно описаны в бланке исследования, клиническом заключении лаборантов. Что это такое, какие заболевания выявляет, в чем преимущества и недостатки анализа и что значат его результаты.
Какой метод диагностики лучше?
- Статьи по теме
- Что такое анализ ПЦР? - статья лаборатории ДНКОМ
- Анализ ПЦР на гепатит В (Б): качественный и количественный. Расшифровка: норма и отклонение
- HCV, РНК количественно [реал-тайм ПЦР]
Анализ ПЦР 12 инфекций
Линейный диапазон концентраций — это диапазон, в котором можно точно посчитать количество копий возбудителя. Метод исследования Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени. Какой биоматериал можно использовать для исследования? Венозную кровь. Не курить в течение 30 минут до сдачи крови. Он способен размножаться в клетках крови нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах и вызывать криоглобулинемию, болезнь Шегрена и В-клеточные лимфопролиферативные заболевания. HCV благодаря высокой мутационной активности способен избегать воздействия защитных механизмов иммунной системы. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза развития заболевания и эффективности противовирусной терапии. Основной путь передачи инфекции — через кровь препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга. Вероятно заражение при половом контакте и ребенка от матери во время родов, но это случается нечасто. Острый вирусный гепатит, как правило, характеризуется бессимптомным течением и остается невыявленным в большинстве случаев.
Хронический вирусный гепатит С протекает с повышением печеночных ферментов и скудным проявлением симптомов.
Для получения правильного результата важна чувствительность системы диагностики. Это нужно для пациентов с невысокой вирусной нагрузкой. Частота проведения количественного анализа Сдача анализов на гепатит с расшифровкой — надежный современный способ диагностики. Исследования проводятся до лечения, во время и после него, при наличии как острой, так и хронической форм заболевания.
Диагностика, проведенная до терапии, определяет его эффективность в дальнейшем. Традиционно исследование проводят перед назначением противовирусной терапии и через три месяца после лечения. Во время лечения забор крови делают на 1-й, 4-й, 12-й и 24-й неделях. Уже на 12-й неделе показатель виремии должен значительно снизиться. Если этого не происходит, лечение неэффективно и нужно подыскивать новое.
Например, с 1 млн МЕ нагрузка должна уменьшиться до 100 тыс.
Также концентрация влияет на успешность назначаемого лечения. Норма количественного анализа Нормальным результатом количественного анализа на гепатит С для здорового человека считается полное отсутствие вируса в крови. На это должен указать качественный анализ, он проводится пациентам, у которых обнаружены антитела к вирусу. Нормой при расшифровке анализов на гепатит С считается — «вирус не обнаружен». Читайте также: Масло орегано против грибка — основные показания, дозировка и применение Если количественный анализ с расшифровкой показал результат меньше 400 тыс. Нагрузку более 800 тыс. Однако среди специалистов нет согласия в определении минимальной и максимальной концентраций. Границей считают 400 тыс.
Вероятность ошибочного результата Получение ошибочного результата возможно. Это может быть объяснено несколькими причинами.
Наличие иммуноглобулинов означает, что пациент либо болеет сейчас, либо переболел коронавирусом недавно. Если антитела отсутствуют, он либо не заражался никогда, либо микроорганизм попал в тело совсем недавно.
Иммунный ответ формируется до двух недель. Данное исследование не стоит воспринимать как пробу на коронавирус. Если антитела к нему есть, значит, контакт с возбудителем был. Но их отсутствие нельзя однозначно трактовать как избегание вируса.
Наличие антител и прививки Положительный результат описанного исследования еще не гарантирует невозможность повторного заражения. Иммунитет формируется ориентировочно на полгода. Поэтому в регионах, где установлены ограничения, QR-коды выдаются не только привитым, но и переболевшим в течение последних шести месяцев. Однако присутствие иммуноглобулинов не отменяет необходимость вакцинации.
Вопреки распространенному мифу, перед прививкой выяснять их количество не нужно. Дополнительная диагностика Перечисленные методы диагностики позволяют установить наличие в организме COVID-19 и иммунный ответ на него. Однако у разных людей заболевание протекает неодинаково: меняется набор симптомов, риски возникновения тех или иных осложнений. Если у выздоровевшего пациента обнаружены антитела в достаточном количестве, это позволяет ему стать донором крови для лечения тяжелых больных.
Для этого ему нужно пройти стандартную диагностику во избежание передачи иных вирусов реципиентам. Коротко обо всех методах диагностики коронавируса Мы рассмотрели возможные методы обнаружения коронавируса в организме, оценки его устойчивости к данному заболеванию. Подчеркнем, что наличие вируса и выявленные антитела к нему — не одно и то же, поэтому и показания к прохождению обследований отличаются. При появлении первых признаков ОРВИ, которую легко перепутать с коронавирусом, лучше сразу выбрать полимеразную цепную реакцию.
На этом этапе важно выяснить, имеет место банальная простуда или более опасное заболевание. Иммуноглобулинов на первых этапах вообще не бывает, так что искать их нет смысла. Когда пациент выздоровел, можно оценить, как отреагировал его иммунитет на перенесенное заболевание. Поиск IgG оправдан и в случае, если пациент полагает, что перенес ковидную инфекцию бессимптомно.